產品描述

原理：FISH（Fluorescence In Situ Hybridization ）是一種利用直接法熒光基團標記或間接法生物素等標記的寡聚核苷酸探針，與組織細胞中的核酸序列（DNA/RNA ）按照堿基互補原則形成靶基因與探針的雜交體，經熒光顯微鏡下顯影目標信號，即可對測定的核酸序列進行相對定性、定量及定位分析。

應用：可以在組織、細胞或染色體等水平對DNA或RNA進行定性、定位或定量分析的實驗技術。廣泛應用于科學研究與疾病診斷

效果承諾

序列正確，符合設計原則，質量（偏差±10%）和純度達標（單鏈18～30bp HPLC純化鑒定 95%±5%），如需質譜鑒定及報告，費用另計100元/條。

l 探針mix（≥3）：對于lncRNA或mRNA，無效可以免費重新合成一次或退票退款或做預付款，如果重新合成需款到發貨，如果再次無效，則不再免費重合；但是cirRNA不保證效果。

l fish 探針試劑盒：對于lncRNA或mRNA，無效可以免費重新合成一次或退票退款或做預付款，如果重新合成需款到發貨，如果再次無效，則不再免費重合；但是cirRNA不保證效果。

l 單條探針和miRNA試劑盒：不保證效果

備注：

1. 效果保證僅限人源鼠源，其他物種不做效果保證，清晰度與樣品、質量、RNA豐度、切片及拍照設備有關，故不做清晰度效果保證。

2. 以上無效需經過公司確認，如果驗證符合公司出貨標準，客戶仍需支付相關費用。

3. 所有陽性或有效性確認，不同細胞表達調控不同，所以只需一種細胞或樣品確認效果即可，不保證所有細胞或樣品一定符合陽性結果。

4. 所有實驗僅供科研使用。

功能介紹與實驗實例

檢測各種RNA寡合苷酸FISH探針案例

3個內參fish探針結果與分析

3個基因（U6/18S/β-actin ）探針熒光照片，這3個基因可以作為后續miRNA和mRNA的陽性對照。

靶基因 H2基因RNA fish結果與分析

進步實驗針對H2基因基因、17號染色體重復區、分別設計了長短寡合苷酸序列，同時為了排除非特異oligo結合，我們設計了長短寡合苷酸陰性對照序列。

陰性對照fish探針結果與分析

靶基因H2基因 RNA fish結果與分析

寡核苷酸探針優點

1、分子量小其序列復雜度低，雜交時間比克隆探針節省10倍
2、短探針堿基的錯配能降低雜交體的Tm值，可識別SNP靶序列變化
3、可直接標記多種基團標簽、合成時間短、大量合成相對價格低廉
4、寡核苷酸探針序列長度可選范圍靈活，可以滿足多種基因形式檢測
5、篩選序列和/或選擇相對長的序列亦可設計出非常特異的寡核苷酸探針

吉瑪FISH探針優點

1.安全、快速、靈敏度高；探針能較長時間保存；?
2.可用于多種基因形式檢測分析；可以進行時、空、量多維度分析；?

3.可應用于新鮮、冷凍或石蠟包埋標本以及穿刺物和脫落細胞等多種物質的檢測。?

使用方法

研究方案流程

1、對目的基因序列進行分析，通過專業軟件預測探針序列；

2、設計探針與同物種其他基因進行比對 ，盡可能排除非特異性

3、 選取特異序列驗證（1或>3個）；

4、組織切片（5-10um，腦組織8-12um）；細胞爬片制備；

5、對探針進行熒光標記和特殊修飾合成；

6、設置相應的實驗對照組，包括陽性和陰性對照

7、相關反應試劑配制，優化核酸探針雜交程序

8、實驗結果拍照結果分析，出具報告組裝相關試劑盒

實驗基本流程

l 玻片的預處理；

? 玻片清洗，硅化處理 

? 黏附劑涂片；APES/APTES (3-氨基丙基)三乙氧基硅烷 

l 熒光探針的選擇和標記；

? 對探針進行熒光標記（FAM或CY3或CY5）和特殊修飾合成；

? 設置相應的實驗對照組，包括陽性和陰性對照

l 樣品處理

? 細胞爬片固定，組織切片（冰凍-復水和石蠟-脫蠟，及蛋白酶處理）

? 變性：50~80℃

? 雜交：探針工作濃度5-50ug/ml，孵育，洗滌，

? DAPI染核，封片，避光4度保存

l 實驗結果拍照結果分析，出具報告組裝相關試劑盒

產品說明書

《RNA FISH 試劑盒（細胞爬片）說明書》: http://www.hclgc.com/pdf/index.php?id=113 《RNA FISH 試劑盒（石蠟切片）說明書》： http://www.hclgc.com/pdf/index.php?id=111 《RNA FISH 試劑盒（冰凍切片）說明書》：http://www.hclgc.com/pdf/index.php?id=110

相關文獻

1. Cao MX, Zhang WL, Yu XH, Wu JS, Qiao XW, Huang MC, Wang K, Wu JB, Tang YJ, Jiang J, Liang XH, Tang YL. Interplay between cancer cells and M2 macrophages is necessary for miR-550a-3-5p down-regulation-mediated HPV-positive OSCC progression. J Exp Clin Cancer Res. 2020 Jun 3;39(1):102.

2. Dong W, Bi J, Liu H, Yan D, He Q, Zhou Q, Wang Q, Xie R, Su Y, Yang M, Lin T, Huang J. Circular RNA ACVR2A suppresses bladder cancer cells proliferation and metastasis through miR-626/EYA4 axis. Mol Cancer. 2019 May 17;18(1):95.

3. Wang Y, Luo W, Huang L, Xiao J, Song X, Li F, Ma Y, Wang X, Jin F, Liu P, Zhu Y, Kitazato K, Wang Y, Ren Z. A novel lncRNA linc-AhRA negatively regulates innate antiviral response in murine microglia upon neurotropic herpesvirus infection. Theranostics. 2021 Sep 21;11(19):9623-9651.

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