+400-6900-195
公司產品
siRNA轉染試劑
GP-transfect-Mate是吉瑪最新推出的新一代RNA高效轉染試劑，可應用于RNA的轉染實驗。
RNA干擾技術已經成為研究基因功能的有力工具。任何一個RNA實驗的成功都有賴于：
1. 高質量的siRNA（或shRNA表達載體）?
2. 有效的轉染方法
目前哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。
陽離子脂質體轉染試劑的選擇對于利用siRNA介導的基因沉默實驗來說同樣是至關重要的。沒有高效的轉染，就不能有效的引發相應的細胞響應，會直接影響同一siRNA的抑制效果。只有將siRNA高效轉染哺乳動物細胞，才能更真實的檢測siRNA干擾基因表達的效果。
如何選擇最適合的轉染試劑和轉染條件，往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。轉染試劑推薦使用GenePharma的轉染試劑—GP-transfect-Mate 。
GenePharma的轉染試劑
RNAi-Mate適用于核酸的體內和體外操作，可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染，也可應用于DNA/siRNA的共轉染操作?，F有的商用siRNA轉染試劑已不能滿足高通量siRNA轉染試驗的需求。因此GenePharma公司推出RNAi-Mate轉染試劑，一種新的高效siRNA轉染試劑。
siRNA-Mate 是吉瑪推出RNA高效轉染試劑，可應用于RNA的轉染實驗。siRNA-Mate加快了與細胞表面糖蛋白的結合，從而促進了細胞的內吞。siRNA-Mate獨特的特點是在內吞時，以及激發內涵體腫脹和破裂時可以保護RNA。最終siRNA-Mate和RNA從內涵體中釋放。這些特點降低了非靶細胞特異性作用，從而增強了高特異性的基因沉默。siRNA-Mate轉染效率高，很低濃度的siRNA就可以產生很高的基因沉默效率，siRNA-Mate可轉染細胞系廣。另外，siRNA-Mate對比其他siRNA轉染試劑，對細胞毒性極小，轉染后細胞狀態最好。siRNA-Mate還是即用型的siRNA轉染試劑，并且此試劑不受血清和抗生素的影響，操作簡單快速。
GP-transfect-Mate是吉瑪基因最新推出的一種高效能高分子聚合物轉染試劑，應用于多種細胞的DNA質粒以及siRNA、miRNA oligo的體外轉染實驗?；谠摼酆衔锝Y構分布一致性高，具有能夠快速、均一性攜帶RNA或DNA等核酸物質復合能力，故可實觀良好的重復性、均一性、低毒性的轉染效果。與其它轉染試劑比較，GP-transfect-Mace轉染效率高、細胞存活率高、毒性小?？蓮V泛用于瞬時和相對穩定轉染，有助于蛋白表達和基因功能的研究。
應用領域：
1、貼壁細胞和懸浮細胞轉染。
2、部分原代細胞和轉化細胞株的基因轉染 。
3、DNA轉染；DNA和siRNA的共轉染。
4、siRNA高通量轉染試驗。
5、核酸（siRNA、DNA、RNA）的體內導入試驗。
特點：
1、不必更換培養基，操作簡便易行，重復性好可在半小時內完成操作。2、介導siRNA高轉染細胞和體內高效導入
3、在含血清培養基中也能表現高轉染效率
4、可在室溫下運輸，在4℃下可長期保存
5、細胞毒性低
6、適用細胞廣泛；即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養基中轉染，操作格外簡單方便。
7、專門用于轉染，確保沒有RNAse活性
| 目錄號 | 產品名稱 | 規格 | 價格 | 交貨期限 |
| G04001 | RNAi-Mate轉染試劑 | 0.1ml | ￥150 | 2個工作日 |
| G04002 | siRNA-Mate轉染試劑 | 0.1ml | ￥150 | 2個工作日 |
| G04003 | siRNA-Mate轉染試劑 | 1ml | ￥1,500 | 2個工作日 |
| G04008 | GP-transfect-Mate | 0.1ml | ￥150 | 2個工作日 |
| G04009 | GP-transfect-Mate | 1ml | ￥1,500 | 2個工作日 |
*本產品僅限于科研用途，而不適用于臨床診斷、治療等其他特殊用途。
產品介紹?
與其它轉染試劑比較，GP-transfect-Mate轉染效率高、細胞存活率高、毒性小?？蓮V泛用于瞬時和穩定轉染，也可以應用于蛋白表達和基因功能的研究。?
轉染試劑保存在 4℃，有效期1年。
重要提示
細胞的狀態：轉染時貼壁細胞的密度以?50%左右為佳，而且轉染時細胞應處在生長旺盛的對數生長期。細胞密度過高和細胞傳代數過高會影響轉染效果。
siRNA的質量：使用高純度的siRNA也是轉染成功的關鍵。在轉染前需確定siRNA的含量和純度，實驗過程中需要使用DEPC處理過的耗材和試劑，注意避免RNAse污染。
血清的影響：在制備 siRNA-mate/GP-transfect-Mate? 和 siRNA 形成復合體過程中不能添加血清，血清會影響復合體形成，建議用OPTI-MEM 或其他無血清培養基（如 DMEM、RPMI-1640 等）稀釋 siRNA 和轉染試劑，以達到復合物形成的最佳效果。但是，在隨后的轉染過程中，血清的存在并不影響復合體的轉染效果。使用GP-transfect-Mate 進行轉染時，多數情況下，在完全培養基中進行轉染，并且轉染后不更換培養基有助于獲得更高的轉染效率和更低的細胞毒性。
轉染試劑的用量：對于一定量的siRNA建議嘗試按照推薦劑量的轉染試劑進行優化，以確定最佳的轉染效率。
GP-transfect-Mate 案例
|
NA oligo |
CAFs
|
A375
|
|
DNA質粒載體 |
NE-4C
|
MGC803
|
轉染的一般性指導
siRNA濃度和用量的一般換算：1OD≈33ug≈2.5nmol? 1OD加125ul的水，得到20uM的濃度。1ul就是20pmol，在1ml細胞培養液中加1ul（20pmol），那終濃度就是20pmol/ml=20nM。加2ul就是40nM，以此類推。如果按ug計算，1OD加125ug水溶解后，質量濃度為?33ug/125ul=0.264ug/ul。
siRNA影響基因阻斷水平 (Gene Knockdown Level)的因素：1、轉染效率
2、目的基因轉錄效率
3、蛋白質穩定性
4、siRNA序列的有效性
5、所選擇哺乳動物細胞系的生長特征
使用GP-transfect-Mate??轉染RNA Oligo進入哺乳動物細胞時，遵從以下一般性指導：
為了獲得最佳基因阻斷結果，每一種細胞系轉染siRNA或miRNA的量都需要經過實驗確定。如果您是首次轉染您的細胞系，推薦嘗試使用幾個 轉染試劑-Mate的濃度，并在1-100nM范圍內改變siRNA或miRNA的濃度，以確定達到最佳基因阻斷水平所需要的條件。高濃度的siRNA或miRNA可能具有細胞系依賴性。
推薦在50％z左右細胞匯合度時進行轉染。通?；蜃钄嗟姆治鲋辽僖谵D染后24-72小時進行。低密度轉染細胞可以使由于細胞過度生長造成的細胞活性損害減少到最低。?GP-transfect-Mate?極低的細胞毒性可以方便研究者根據目的細胞生長特性，靶基因的表達特性，選擇適合條件進行轉染。
通過合適的FAM-NC、陽性對照優化轉染和檢測條件?？梢允褂眉敓晒鈽擞浀年幮詫φ招蛄校ǜ鶕康腞NA oligo類型，請選擇對應的對照。Cat. No. A07001, B04004, B04005, B04006）幫助優化細胞系的轉染條件。一旦確定了用來轉染的最佳條件，推薦在每一次實驗都包括熒光標記的陰性對照序列，作為轉染效率的指示劑。對大多數細胞，看家基因是較好的陽性對照（Cat. No. A08005, A08008）。將不同濃度的陽性對照的siRNA轉入靶細胞（同樣適合實驗靶siRNA），轉染48小時后統計對照蛋白或mRNA相對于未轉染細胞的降低水平。過多的siRNA將導致細胞毒性以至死亡。
避免RNA酶污染。微量的RNA酶將導致siRNA/miRNA實驗失敗。由于實驗環境中RNA酶普遍存在，如皮膚，頭發，所有徒手接觸過的物品或暴露在空氣中的物品。因此保證實驗每個步驟不受RNA酶污染非常重要。尤其直接接觸Oligo原液的槍頭、Tube，請務必保證RNase free。我們推薦商業化的RNase free的槍頭及Tubes。
健康的細胞培養物和嚴格的操作確保轉染的重復性。通常，健康的細胞轉染效率較高。此外，較低的傳代數能確保每次實驗所用細胞的穩定性。為了優化實驗，推薦用50代以下的轉染細胞，否則細胞轉染效率會隨時間明顯下降。
目的檢測時間點。細胞轉染后，不同細胞和RNA效率存在差異。一般來說，在mRNA水平觀察RNAi效果的最佳時間是轉染后24-48小時，在蛋白水平觀察RNAi效果的最佳時間是轉染后48-72小時。siRNA干擾是拋物線形的，不同基因的半衰期是不同的，多做幾個時間點有利于siRNA干擾效果的測定。
轉染操作注意：將siRNA/miRNA oligo—GP-transfect-Mate復合物逐滴均勻滴加到每一個包含細胞和培養基的孔中。均勻滴加后可以輕輕地前后搖動培養板混合均勻。
需要準備的材料
開始實驗前準備下列試劑：
目的哺乳動物細胞系（使用傳代數低的細胞；轉染前確信細胞健康和超過90％的存活率）
目的siRNA或者miRNA Oligo（吉瑪推薦溶解至20μM儲液）
?GP-transfect-Mate??（使用前貯存在+4℃）
培養基（使用前37℃預熱）
合適的細胞培養板及其它
GP-transfect-Mate?操作流程（24?孔板）
以24 孔板為例，若要檢測基因沉默或者過表達效果，推薦最低RNA oligo終濃度為50nM ，（DNA為0.5~1.5μg）；遵循以下操作方法可以高效地將RNA? oligo或者DNA轉染貼壁和懸浮培養的多種真核細胞。但是對某些特殊的細胞系和培養條件，或特殊應用等，也需要單獨特別優化，請參考表 1、表2。
1.?細胞鋪板
轉染時細胞密度：一般來說，當細胞密度達到60%～80%時進行轉染可以取得較高的轉染效率(參見表1)。然而，不同細胞的最適轉染密度都不盡相同，因此在初次轉染某種細胞時，可以通過預實驗先確認該細胞最佳的轉染密度。
2.?轉染復合物的制備
（1）將 GP-transfect-Mate轉染試劑放置于室溫中，使用前輕輕混勻。
（2）在1.5 ml無菌離心管中加入50 μl無血清培養基或 OPTI-MEM，并添加適量的轉染試劑(參見表2)，用移液器輕輕混勻，室溫靜置5 min。
（3）同時在另一1.5 ml無菌離心管中加入50 μl無血清培養基或 OPTI-MEM，并添加適量的RNA oligo/DNA (參見表2)，用移液器輕輕混勻，室溫靜置5 min。
（4）將GP-transfect-Mate-培養基混合物滴加至RNA oligo/DNA-培養基混合物中，用移液器輕輕混勻，室溫靜置15-20 min 后，立即轉染。
注：復合物盡量在60 min內使用，并且GP-transfect-Mate-培養基混合物和RNA oligo/DNA-培養基混合物的混合次序非常重要，切勿顛倒。
3.?轉染過程
（1）趁靜置時，給 24 孔板換液，每孔換上 0.4ml 預熱的新鮮培養基。
（2）將 100 μl 轉染混合物加入孔中，終體系為500 μl。加完后將板輕輕晃動以使復合物均勻分布。
（3）37℃靜置培養細胞，4-6h換成完全培養基。24-72 h檢測mRNA表達，48-96 h檢測蛋白表達。
適用范圍
293T, A549, Beas-2B,HeLa,ECA-109,Raw264.7,A375,CAFs,HCT116,HT29,LMH,NE-4C,MGC803，PC-3, PC-12，MCF-7,C6等細胞。
表?1:?貼壁細胞或懸浮細胞接種數量、培養基體積
培養器皿
每孔表面積（cm2）
每孔培養基的體積（ml）
貼壁細胞轉染前一天接種密度
懸浮細胞轉染當天接種密度
96?孔板
0.3
0.1
5 000±2 500
2-5×104
24?孔板
2
0.5
25000±10 000
1-2.5×105
12?孔板
4
1
50000±20 000
2-5×105
6?孔板
10
2
150000±50 000
0.4-1×106
60mm
20
4
400000±100 000
1-2.5×106
100mm
60
10
1*106±250 000
2-5×106
注：貼壁細胞培養密度取決于培養器皿的表面積，而懸浮細胞則由培養基的體積決定。
表?2?不同培養板轉染DNA/RNA??oligo的推薦轉染條件
|
培養器皿 |
Growth Medium |
Opti-MEM/ Serum-free Mediumfor complex |
DNA?轉染 |
RNA轉染 |
||
|
DNA/μg |
轉染試劑/μl |
RNA/pmol |
轉染試劑/μl |
|||
|
96?孔板 |
100 μl |
2×10μl |
0.2 |
0.4-1 |
20 |
0.5-1 |
|
24?孔板 |
500 μl |
2×50μl |
0.6 |
1.2-3 |
40 |
1-3 |
|
12?孔板 |
1ml |
2×100μl |
1.5 |
3-6 |
80 |
3-5 |
|
6?孔板 |
2 ml |
2×200 μl |
3 |
6-12.5 |
150 |
5-8 |
|
60mm |
5ml |
2×500 μl |
6-10 |
12-20 |
300 |
10-20 |
|
100mm |
10 ml |
2×1ml |
15-30 |
30-60 |
500 |
25-35 |
注：GP-transfect-Mate轉染試劑的用量在此范圍內進行優化。
siRNA-MateTM轉染步驟（以24孔板為例）?
使用siRNA-MateTM轉染siRNA或miRNA Oligo進入哺乳動物細胞時，使用下述步驟。參閱表1-表3，確定加入不同組織培養方式的試劑量以及體積。吉瑪推薦以5nM siRNA或miRNA Oligo終濃度，及表1中推薦的siRNA-MateTM的量作為優化的起始點，客戶可針對目的細胞系和siRNA或miRNA Oligo（推薦終濃度范圍1-100nM）進行優化。
轉染前一天，根據表1推薦的細胞數量，提前一天將細胞接種在24孔板中，以轉染時細胞的匯合度 (Confluence) 在30-50％為宜。
每一個轉染樣品按照如下的方法準備siRNA/miRNA oligo—siRNA-Mate復合物：
轉染前，取siRNA/miRNA oligo儲液適量稀釋至1uM（吉瑪推薦的儲液是20uM，取1ul加入19ul RNase free water，稀釋至1uM）。取3ul 1uM的siRNA/miRNA oligo溶液加入到100 μl Opti-MEM或無血清DMEM，無血清1640。輕輕混勻，室溫放置5min。
孵育5min后，取2ul siRNA-MateTM加入到a.中準備好的培養基稀釋的siRNA/miRNA oligo，加入后立即充分混勻（可用振蕩器振蕩或用加樣器吹吸10次以上），輕微離心后，室溫放置10min（請保證足夠時間靜置，且孵育時間不超過1h）。以便允許siRNA/miRNA oligo—siRNA-Mate復合物的形成。
在復合物孵育的10min內，從細胞培養板中移除原有的培養基。每孔加入500ul的完全培養基（可含10%血清和抗生素）。siRNA-MateTM不受血清和抗生素的影響。
將siRNA/miRNA oligo—siRNA-Mate復合物逐滴滴加到每一個包含細胞和培養基的孔中。輕輕地前后搖動培養板混合均勻。使用siRNA-MateTM轉染中無需去除復合物或者改換培養基，若目的細胞本身對于轉染操作較為敏感（如原代細胞），我們建議可在轉染后4-6小時改換完全培養基，并不會損失轉染的活性。
37℃，CO2培養箱孵育24-96小時，直到適合進行目的基因分析。我們建議做目的RNA檢測可在24-48h收集細胞檢測，目的蛋白檢測可在48-72h收集檢測。
表1 提前1天種植細胞數量和培養基體積
| 培養容器 | 轉染前1?天接種細胞數量 | 每孔表面積(cm2) | 每孔培養基總體積(ml) |
| 96-well> | 7 500 ± 2 500> | 0.3> | 0.2 ml> |
| 48-well> | 15 000 ± 5 000> | 1> | 0.5 ml> |
| 24-well> | 25 000 ± 10 000> | 1.9> | 1 ml> |
| 12-well> | 50 000 ± 20 000> | 3.8> | 2 ml> |
| 6-well/ 35 mm> | 150 000 ± 50 000> | 9.4> | 4 ml> |
| 60 mm/ T25 flask> | 400 000 ± 100 000> | 28> | 8 ml> |
| 100 mm/ T75 flask> | 1 000 000 ± 250 000> | 78.5> | 15 ml> |
表2 siRNA-MateTM推薦用量（24孔板）
| siRNA/miRNA終濃度$3C4FSTRONG> |
siRNA-MateTM用量/24孔 |
| > 10 nM | 3 ± 1 ul |
| ≤10 nM | 1 to 2 μl |
表3 不同細胞培養容器轉染推薦用量
| 培養容器 | 表面積相對于24孔比率 | RNA用量（pmol） | siRNA-MateTM用量 | RNA—siRNA-Mate復合物 | 每孔培養基 | 總體積 | RNA終濃度* |
| 96-well | 0.2 | 0.85 | 1 ± 0.5 μl | 50 μl | 125 μl | 175 μl | 5nM |
| 24-well | 1 | 3 | 2 ± 1 μl | 100 μl | 500 μl | 600 μl | 5nM |
| 12-well | 2 | 6 | 4 ± 2 μl | 200 μl | 1 ml | 1.2 ml | 5nM |
| 6-well/ 35 mm | 5 | 11 | 8 ± 2 μl | 200 μl | 2ml | 2.2 ml | 5nM |
| 60 mm/ T25 flask | 10 | 22 | 15 ± 5 μl | 400 μl | 4ml | 4.4 ml | 5nM |
| 100 mm/ T75 flask | 15 | 52.5 | 40 ± 10 μl | 500 μl | 10ml | 10.5 ml | 5nM |
建議根據您的實驗體系做RNA終濃度的優化。
?
其它事項
RNA有效濃度和轉染試劑量的優化。為得到更好的結果，優化方案每孔RNA量可以從1nM-100nM優化。
細胞密度。不同的細胞密度可能會極大影響轉染效率和細胞毒性，為求最佳轉染效果，建議轉染時的細胞密度從30%到50%進行不同細胞梯度轉染，確定最佳轉染數量。
稀釋用液的選擇。在配置RNA-siRNA-Mate復合物時，必須采用無血清培養基！建議采用OPTI-MEM、無血清DMEM或無血清1640。
培養時間。應用本轉染試劑后，由于不同細胞和RNA效率的差異，一般來說，在mRNA水平觀察RNAi效果的最佳時間是轉染后24-48小時，在蛋白水平觀察RNAi效果的最佳時間是轉染后48-72小時。
細胞生長的培養基。細胞生長的培養基沒有特殊要求，可以采用含血清培養基或加入抗生素。
1.La X, Zhang L, Li Z, Yang P, Wang Y. Berberine-induced autophagic cell death by elevating GRP78 levels in cancer cells. Oncotarget. 2017 Mar 28; 8(13): 20909-24.
2.Chen JF, Wu QS, Xie YX, Si BL, Yang PP, Wang WY, Hua Q, He Q. TRAP1 ameliorates renal tubulointerstitial fibrosis in mice with unilateral ureteral obstruction by protecting renal tubular epithelial cell mitochondria. The FASEB Journal. 2017 Jul.
3.Huang Z, Li S, Fan W, Ma Q. Transforming growth factor β1 promotes invasion of human JEG-3 trophoblast cells via TGF-β/Smad3 signaling pathway. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33560-70.
4.Tan J, Yang L, Liu C, Yan Z. MicroRNA-26a targets MAPK6 to inhibit smooth muscle cell proliferation and vein graft neointimal hyperplasia. Scientific Reports. 2017 Apr; 7: 46602. LINK133'>Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33560-70.
5.Wu R, Li X, Xu P, Huang L, Cheng J, Huang X, Jiang J, Wu LJ, Tang Y. TREM2 protects against cerebral ischemia/reperfusion injury. Molecular Brain. 2017 Jun 7; 10(1): 20. LINK133'>Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33560-70.
6.Fu J, Xia X, Liu Z, Wang YW, Wang YX, Shi Q, Song X, Song E, Song Y. The acute exposure of tetrachloro-p-benzoquinone (aka chloranil) triggers inflammation and neurological dysfunction via Toll-like receptor 4 signaling: The protective role of melatonin preconditioning. Toxicology. 2017 Apr 15; 381: 39-50.
7.Gao R, Chen R, Cao Y, Wang Y, Song K, Zhang Y, Yang J. Emodin suppresses TGF-β1-induced epithelial-mesenchymal transition in alveolar epithelial cells through Notch signaling pathway. Toxicology and Applied Pharmacology. 2017 Mar 1; 318: 1-7. r 15; 381: 39-50.
8.Chen H, Lv M, Lv Z, Li C, Zhang W, Zhao X, Duan X, Jin C, Xiong J, Xu F, Li Y. Divergent roles of three cytochrome c in CTSB-modulating coelomocyte apoptosis in Apostichopus japonicus. Developmental & Comparative Immunology. 2017 Nov; 76: 65-76 ; 381: 39-50.
9.Yang H, Ma L, Wang Y, Zuo W, Li B, Yang Y, Chen Y, Chen L, Wang L, Zhu L. Activation of ClC‐3 chloride channel by 17β‐estradiol relies on the estrogen receptor α expression in breast cancer. Journal of Cellular Physiology. 2017 Jun.
10.Li L, Li X J, Wu YM, Yang L, Li W, Wang Q. Vitellogenin regulates antimicrobial responses in Chinese mitten crab, Eriocheir sinensis. Fish & Shellfish Immunology. 2017 Oct; 69: 6-14. ?
目錄分類 本商品目錄中的產品介紹按以下內容分類：
1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?
產品價格 本產品目錄中標示的價格均為國內統一零售參考價，全部為人民幣價格。如果大量定購時，在標準價格的基礎上有不同程度的優惠。?
質量保證 凡吉瑪公司的產品均有嚴格的質量保證。如果我們發現確實存在質量問題時，保證更換產品。如果在到貨后一個月之內用戶無提出異議，我們將視本產品為優良產品而不再受理投訴事宜。提出產品異議（或投訴）時，切莫在產品使用完（或快使用完）后提出，以備本公司回收產品，確認產品質量。由于訂錯產品而產生的退貨情況，原則上由客戶承擔相關費用。發生投訴事宜時，公司只保證在產品價格額度范圍之內酌情賠償，恕不受理超過制品價格額度以上之部分。退款時需退還原始發票。
下單前請務必核對訂購表客戶信息和訂購內容無誤，訂單一經確認，當天即啟動生產。 超過當日17：00后不能修改或者取消，如果需要取消訂單，由此產生的費用，將由客戶承擔。
【取消訂單費用規則】
（1）當日17：00前，免費修改或取消。
（2）當日17：00到次日17：00前，按該項產品金額的50%收取。
（3）次日17：00后，按該項產品金額的100%收取。
更多產品訂購