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    1. 公司產品

      shRNA慢病毒載體

      慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質??商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,

      產品描述

      慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質??商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進入到宿主細胞之后,經過反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。


      載體的技術特點

      1、大大提高對于一些較難轉染的細胞, 如原代細胞、干細胞、不分化的細胞等轉導效率
      2、快速獲得高水平的表達
      3、目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加
      4、將免疫反應降到最低
      5、能夠插入大的片段(~7.5 kb)
      6、能夠應用于干細胞研究
      7、最低的細胞毒性


      慢病毒表達系統

      本公司使用的慢病毒表達系統,它由三部分組成:慢病毒表達載體、慢病毒包裝質粒、可產生假病毒顆粒的細胞系。


      慢病毒表達載體包含了包裝、轉染、穩定整合所需要的遺傳信息。慢病毒包裝質??商峁┧械霓D錄并包裝RNA到重組的假病毒載體所需要的所有輔助蛋白。為產生高滴度的病毒顆粒,需要利用表達載體和包裝質粒同時共轉染細胞,在細胞中進行病毒的包裝,包裝好的假病毒顆粒分泌到細胞外的培養基中,離心取得上清液后,可以直接用于宿主細胞的感染,目的基因進入到宿主細胞之后,經過反轉錄,整合到基因組,從而高水平的表達效應分子。


      慢病毒介導的 siRNA活體實驗用病毒液服務流程

      對于活體 RNAi實驗模型,吉瑪公司可以為您生產高質量的病毒液,服務流程如下:

      根據目的基因相關信息(序列,序列號等),利用高效的設計軟件,設計 siRNA序列,針對每條目的基因,我們設計4條siRNA序列,其中1條序列為陰性對照組;

      根據設計好的 siRNA序列,設計,合成兩條互補的短片段的DNA;

      對合成好的 DNA片段進行稀釋,退火,連接到線形化處理過的載體,轉化,涂平板,過夜培養;

      通過 PCR的方法篩選陽性菌落,進行測序,分析測序結果;

      對于測序正確的重組質粒,提取和純化高質量的不含內毒素的 siRNA病毒穿梭質粒;

      利用構建好的質粒做轉染實驗, 48小時后通過實時熒光定量和Western的方法分析目的基因,篩選出一條最有效的siRNA序列;

      篩選出的高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染 293T細胞,進行病毒包裝和生產,收集病毒液;

      濃縮、純化病毒液,測定滴度;

      提供高質量的病毒液給客戶(對于活體實驗,我們建議的病毒基本單位為 1×10^9TU/ml ,對于小鼠尾靜脈給藥建議50~100ul/只)


      Lentiviral shRNA的基因沉默效率



      Lentiviral shRNA 抑制生長導管形成



      Lentiviral shRNA 引起的表型變化



      即用型Lentivirus shRNA構建包裝服務

      Lentivirus shRNA服務特點:

      1、適用于原代培養細胞,難以轉染的各種細胞

      2、可用于制備多種穩定沉默特定基因的細胞株

      3、您通過GenePharma SupersilencingTM Vector方法篩選到有效的的基因沉默靶點,如果您需要構建慢病毒載體來滿足實驗需求



      Lentivirus shRNA載體

      GenePharma Supersilencing Vector 干擾載體 
      包裝載體:Helper vector-I
      Helper vector-II
      Helper vector-III
      提高包裝效率和對特定細胞的感染力,提高生物安全性



      品質保證

      客戶自己提供的序列委托我們制備的病毒顆粒,我們確保制備的病毒顆粒攜帶片段的正確性,確保病毒顆粒的總數和病毒顆粒的滴度達到合同規定的要求。

      siRNA高效表達慢病毒載體構建

      1. 通過專業設計人員的精心篩選獲得欲篩選的siRNA序列。

      2. 設計siRNA 正義、反義鏈,選擇相應loop結構,加上酶切位點的目的序列。

      3. 合成相應的DNA序列,然后克隆于相應的慢病毒表達載體。

      4. 將載體轉化到宿主菌中進行克隆、篩選,得到質粒重組體即siRNA表達載體。

      5. siRNA表達載體在真核細胞中可產生siRNA,從而在細胞內產生特定基因的沉默效果。此方法是多種siRNA制備方法中唯一可以進行長期基因沉默研究的方法。

      本公司為您提供siRNA高效表達慢病毒載體構建服務。構建好的siRNA表達載體,可直接用于轉染細胞進行RNA干擾操作。


      服務要求 

      1. 通過E-mail發送訂單,告知選定的相應的基因信息,待構建的靶點信息。靶基因在NCBI數據庫中的Gene ID、Accession No.

      2. 我們可為您免費設計siRNA序列.

      訂購流程

      1. 請用E-mail或者電話聯系吉瑪公司。E-mail:order@genepharma.com;Tel:021-51320195。

      2. 根據客戶提供的基因信息設計siRNA序列,并由客戶確認。 

      3. 根據客戶提供的siRNA序列信息或經客戶確認的siRNA序列信息設計引物。 

      4. 根據所選擇的慢病毒載體構建相應的siRNA表達載體。 

      5. 在完成相應的試驗后,我們將為您提供一套完整的實驗結果,其中包括:實驗操作說明、電子版的測序結果及彩圖、構建好的siRNA慢病毒表達載體質粒及其甘油菌等。 

      目錄號 產品名稱 規格 價格 交貨期限
      C06001 慢病毒干擾載體LV-1 (pGLVU6/GFP) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06002 慢病毒干擾載體LV-2N (pGLVU6/Puro) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06003 慢病毒干擾載體LV-3 (pGLVH1/GFP+Puro) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06004 慢病毒干擾載體LV-9N (pGLVU6/mCherry) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06005 慢病毒干擾載體LV-10N (pGLVU6/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06006 慢病毒干擾載體LV-12 (pGLVH6/luci05/Puro) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06007 慢病毒干擾載體LV-15N (pGLVH1/mCherry/Puro) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06008 慢病毒干擾載體LV-16 (pGLVU6/Firefly/Puro) 50μg ¥1,000 15個工作日
      C06027 慢病毒干擾載體 LV-U6-Neo  50μg ¥1,000 15個工作日
      C06028 慢病毒干擾載體 LV-U6-copGFP-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15個工作日
      C06029 慢病毒干擾載體 LV-U6-mCherry-T2A-Neo  50μg ¥1,000 15個工作日
      C06030 慢病毒干擾載體 LV-U6-Luci17-T2A-Neo    50μg ¥1,000 15個工作日



      吉瑪基因shRNA慢病毒載體圖譜


                         

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      功能介紹與實驗實例

      慢病毒載體是一類重組逆轉錄病毒載體,由於其結構和功能的特點作為一種重要的基因轉移工具被應用於 基因治療和細胞分子生物學研究領域,區別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能 力。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。在感染能力方面可有效地感染 神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因治 療效果。慢病毒載體的研究發展得很快,研究的也非常深入。在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,因 此具有廣闊的應用前景。

       1、 大大提高對於一些較難轉染的細胞, 如原代細 胞、干細胞、不分裂的細胞等轉導效率 


      2、 目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加 


      3、能夠插入大的片段(~ 7.5 kb) 


      4、最低的細胞毒性 


      慢病毒滴度檢測照片

      200×熒光顯微鏡下觀察熒光進行滴度檢測96孔細胞板 10ul陰性對照病毒原液稀釋10-5后,
      1ml病毒原液滴度100(一個視野100個熒光細胞)×4(平均4個視野)×105(稀釋倍數)×100=4×10^9 TU/ml








      使用方法

      慢病毒介導的 siRNA活體實驗用病毒液服務流程

      對於活體 RNAi實驗模型,吉瑪可以為您生產高質量的病毒液,服務流程如下:

      1、根據目的基因相關信息(序列,序列號等),利用高效的設計軟件,設計 shRNA序列,針對每條目的
      基因,我們設計4條shRNA序列;

      2、根據設計好的 shRNA序列,設計,合成兩條互補的短片段的DNA;

      3、對合成好的 DNA片段進行稀釋,退火,連接到線形化處理過的載體,轉化,涂平板,過夜培養;

      4、通過 PCR的方法篩選陽性菌落,進行測序,分析測序結果;

      5、對於測序正確的重組質粒,提取和純化高質量的不含內毒素的 shRNA病毒穿梭質粒;

      6、篩選出的高效重組載體和病毒包裝質粒共轉染 293T細胞,進行病毒包裝和生產,收集病毒液;

      7、濃縮、純化病毒液,測定滴度;

      8、提供高質量的病毒液給客戶(對於活體實驗,我們提供的病毒基本單位為 1×10^8TU/ml ,這個單位為一只小鼠一次實驗的平均用量)

      產品說明書

      相關文獻

      1.Qu H, Lin K, Wang H, Wei H, Ji B, Yang Z, Peng C, Xiao X, Deng H. 1, 25 (OH) 2D3 improves cardiac dysfunction, hypertrophy, and fibrosis through PARP1/SIRT1/mTOR‐related mechanisms in type 1 diabetes. Molecular nutrition & food research. 2017 May; 61(5).

      2.Sun W, Cai H, Zhang G, Zhang H, Bao H, Wang L, Ye J, Qian G, Ge C. Dmrt1 is required for primary male sexual differentiation in Chinese soft-shelled turtle Pelodiscus sinensis. Scientific Reports. 2017 Jun; 7: 4433. 

      3.Tan X, Lv J, Zhao G, Zhao Z, Li C, Xu Y, Hu M. MicroRNA‐4656 is a prognostic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

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      5.Yan X, Zhu Z, Xu S, Yang LN, Liao XH, Zheng M, Yang D, Wang J, Chen D, Wang L, Liu X, Liu J, Chen RH, Zhou XZ, Lu KP, Liu H. MicroRNA-140-5p inhibits hepatocellular carcinoma by directly targeting the unique isomerase Pin1 to block multiple cancer-driving pathways. Scientific Reports. 2017; 7: 45915. stic factor and tumor suppressor in human pancreatic cancer through a downstream target of TrkA. The journal of gene medicine. 2017 Jan; 19.

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      10.Chen MB, Ji XZ, Liu YY, Zeng P, Xu XY, Ma R, Guo ZD, Lu JW, Feng JF. Ulk1 over-expression in human gastric cancer is correlated with patients' T classification and cancer relapse. Oncotarget. 2017 May 16; 8(20): 33704-12.

      11.Li J, Wang P, Xie Z, Yang R, Li Y, Wu X, Su H, Deng W, Wang S, Liu Z, Cen S, Ouyang Y, Wu Y, Shen H. Elevated TRAF4 expression impaired LPS-induced autophagy in mesenchymal stem cells from ankylosing spondylitis patients. Experimental & Molecular Medicine. 2017 Jun; 49(6): e343.

      12.Liu N, Zhang L, Wang Z, Cheng Y, Zhang P, Wang X, Wen W, Yang H, Liu H, Jin W, Zhang Y, Tu Y. MicroRNA-101 inhibits proliferation, migration and invasion of human glioblastoma by targeting SOX9. Oncotarget. 2017 Mar 21; 8(12): 19244-54.

      13.Liu W, Mao L, Ji F, Chen F, Hao Y, Liu G. Targeted activation of AMPK by GSK621 ameliorates H2O2-induced damages in osteoblasts. Oncotarget. 2017 Feb 2; 8(6): 10543-52.

      14.Zhang C, Zhang W, Lu Y, et al. NudC regulates actin dynamics and ciliogenesis by stabilizing cofilin 1. Cell research. 2016 Feb; 26: 239-53.



      訂購須知

      目錄分類 本商品目錄中的產品介紹按以下內容分類:

      1. RNA干擾研究工具
      2. MicroRNA研究工具 

      產品價格 本產品目錄中標示的價格均為國內統一零售參考價,全部為人民幣價格。如果大量定購時,在標準價格的基礎上有不同程度的優惠。 

      質量保證 凡吉瑪公司的產品均有嚴格的質量保證。如果我們發現確實存在質量問題時,保證更換產品。如果在到貨后一個月之內用戶無提出異議,我們將視本產品為優良產品而不再受理投訴事宜。提出產品異議(或投訴)時,切莫在產品使用完(或快使用完)后提出,以備本公司回收產品,確認產品質量。由于訂錯產品而產生的退貨情況,原則上由客戶承擔相關費用。發生投訴事宜時,公司只保證在產品價格額度范圍之內酌情賠償,恕不受理超過制品價格額度以上之部分。退款時需退還原始發票。



      訂貨方法 我們的聯絡方式如下:


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