產品描述

miRNA ?miR-DownTM ?antagomir 及miR-UPTM agomir 產品

Agomir是經過特殊標記和化學修飾的雙鏈小RNA,通過模擬內源性的miRNA來調節靶基因的生物學功能。吉瑪公司依靠領先的核酸化學合成技術，推出miRNA mimics、inhibitor的升級產品,miRNA agomir和antagomir.為您提供更經濟的實驗方案，更輕松的實驗操作，更完美的實驗結果。
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antagomir 和agomir 具有如下優點：?

1、與普通miRNA inhibitor和mimics相比，antagomir 和agomir與細胞膜親和力更高，細胞轉染實驗轉染試劑用量顯著減少。

2、特別適合動物體內干擾實驗.并且在體內實驗中具有更高的穩定性和抑制效果，可以采用全身注射或局部注射等多種方式給藥，操作簡便。

3、可富集于靶細胞，實現高效的特異性穩定干擾

4、抑制持續時間長,至少達到一周時間,干擾效果最長可持續5-6周。

antagomir 及agomir 化學修飾結構

antogimir 3’端進行膽固醇修飾，5’端兩個硫代骨架修飾，3’端四個硫代骨架修飾，全鏈甲氧基修飾。
agomir在反義鏈進行修飾，3’端進行膽固醇修飾，5’端兩個硫代骨架修飾，3’端四個硫代骨架修飾全鏈甲氧基修飾

訂購須知

1.?agomir保證序列正確、質量和純度達標，達到共同保證要求，轉染效率80%保證一種qPCR方法能檢測到miRNA上調顯著性差異（與對照比較），只接受一次無效投訴，需款到后發送重合產品，如果重新合成后再次無效，則不再接受投訴處理。由于靶基因調控因素較多，不保證其調控相關基因變化。

2.?antagomir保證序列正確、質量和純度達標，達到共同保證要求，但鑒于miRNA抑制劑結合后不一定降解miRNA，且沒有變更序列堿基可能，故不保證qPCR方法能檢測到miRNA下調顯著性差異（與對照比較）。

功能介紹與實驗實例

使用方法

A．siRNA轉染的方法

哺乳動物轉染的常見方法有：磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法（例如,顯微注射和基因槍）、陽離子脂質體試劑，其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。

應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面：轉染試劑的用量、siRNA的用量、轉染時的細胞密度、轉染時的操作順序、細胞與轉染試劑/siRNA復合物的溫浴的時間


B．Lipofectamin2000 轉染試劑

選擇最適合的轉染試劑和轉染條件，往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000適用于核酸的體內和體外操作，可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染，也可應

用于DNA/siRNA的共轉染操作；是一種新型的高效siRNA轉染試劑。


Lipofectamin2000的應用領域：

1、原代培養細胞和轉化細胞株的基因轉染
2、siRNA高通量轉染試驗
3、DNA轉染；DNA和siRNA的共轉染
4、核酸（siRNA、DNA、RNA）的體內導入試驗
5、貼壁細胞和懸浮細胞轉染


Lipofectamin2000 的特點：?

1、不必更換培養基，操作簡便易行，可在半小時內完成操作
2、在含血清培養基中也能表現高轉染效率
3、細胞毒性低；適用細胞廣泛
4、即用型試劑，可在含有抗生素的完全培養基中轉染
5、基于脂質的轉染試劑，確保沒有RNAse活性
6、可介導siRNA高轉染細胞及體內siRNA的高效導入


C. Lipofectamin2000適用的細胞類型

Lipofectamin2000轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的DNA和siRNA轉染如：HeLa(人頸部癌細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒5 DNA轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4細胞等。


D．轉染前細胞培養

在細胞板上培養細胞時，應使細胞匯合在24小時內達到70-90%。


E．合適的lipofectamin2000用量

合適的siRNA(DNA)：lipofetamin2000比例對核酸的高效轉染有重要影響；我們推薦的DNA：lipofetamin2000為1：0.5—1：5（ug:ul），siRNA：lipofectamin2000為1：0.01-1：0.1（pmol：ul）一般情況下，此范圍內都可獲得高的轉染效率。



F．貼壁細胞轉染程序

選用生理狀態良好的細胞對提高轉染效率很重要。siRNA(DNA)和lipofectamin的用量和兩者的比例可在推薦范圍內適當調整。

1、轉染前一天，4-5′104細胞接種在24孔板上， 0.5mL含FBS和抗生素的DMEM（或Opti-MEM，其他培養基）細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞數量，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。
3、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
4、混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μllipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；

5、將稀釋好的siRNA和RNAi-Mate試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。
6、將100μl siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物加到含有細胞和培養基的培養板的孔中，來回輕柔搖晃細胞培養板板。
7、 細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。 ?


G．懸浮細胞轉染程序

1、轉染的當天，收集細胞離心，用含FBS的培養基重懸。
2、在50μl的DMEM（或Opti-MEM，或其他無血清培養基）無血清的培養基加入20pmol siRNA(或0.8μg DNA)，柔和混勻；
3、混勻lipofectamin試劑，用50μl無血清的DMEM或Opti-MEM，或其他無血清培養基）稀釋1μl lipofectamin試劑（DNA轉染時，則加入2μl lipofectamin試劑），輕輕混勻，室溫放置5分鐘；
4、將稀釋好的siRNA和lipofectamin試劑混合；輕柔混勻，室溫放置20分鐘,以便形成siRNA/lipofectamin（或DNA/lipofectamin）復合物。
5、再加入400μL細胞懸浮液（細胞數量決定于細胞類型和轉染后分析測試的時間）。
6、細胞在CO2培養箱中37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它檢測步驟。如果細胞株比較敏感，孵育4-6小時后，除去復合物，更換培養基。 ?



H．DNA和siRNA共轉染細胞

1、在轉染的前一天，4-5′104細胞接種在24孔板上，0.5 mL含FBS和抗生素的細胞培養基。
2、選擇用于初期接種的細胞密度，應能在24小時內使細胞匯合達到70-90%。
3、在100μL的無血清的培養基中稀釋20pmol siRNA和0.2μg DNA，加入2μl lipofectamin試劑，充分混合，放置20分鐘,以便形成siRNA/ DNA/lipofectamin復合物。
4、將siRNA/ DNA/lipofectamin復合物加入培養基中，輕輕混勻。
5、細胞在37℃溫育24h-48h后，進行轉染后的其它步驟。


I．siRNA體內導入方法

1、適量的siRNA或DNA溶于不含RNA酶的無菌水中，輕輕混勻，因為注射液體積有限，建議采用高濃度的siRNA或DNA，一般DNA為2μg /μL、siRNA為10μg /μL。
2、取適量的DNA、siRNA或siRNA\DNA復合物與lipofectamin混合。例如，在1#管中加入0.5μL的DNA（1μg）和0.5μL的siRNA（5μg），在2#管中加入0.55μL的lipofectamin（24μg）和0.45μL不含RNA酶的無菌水中，將1#管中的溶液加入2#管中，在室溫下溫育30分鐘，以形成siRNA/DNA-lipofectamin復合物。
3、制備的siRNA/DNA-lipofectamine復合物可用于體內導入siRNA、DNA或siRNA\DNA。

產品說明書

相關文獻

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2.Su S, Shao J, Zhao Q, Ren X, Cai W, Li L, Bai Q, Chen X, Xu B, Wang J, Cao J, Zhang W. MiR-30b Attenuates Neuropathic Pain by Regulating Voltage-Gated Sodium Channel Nav1. 3 in Rats. Frontiers in molecular neuroscience. 2017 May; 10: 126.?

3.Tan J, Yang L, Liu C, Yan Z. MicroRNA-26a targets MAPK6 to inhibit smooth muscle cell proliferation and vein graft neointimal hyperplasia. Scientific Reports. 2017 Apr; 7: 46602.

4.Tian L, Zheng F, Li Z, Wang H, Yuan H, Zhang X, Ma Z, Li X, Gao X, Wang B. miR-148a-3p regulates adipocyte and osteoblast differentiation by targeting lysine-specific demethylase 6b. Gene. 2017 Sep 5; 627: 32-9.?

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2017 Jun; 7: 4247. rk:OLE_LINK66'>Oncotarget. 2017 Apr 11; 8(15): 24949-63.?

9.Wang K, Long B, Zhou L Y, et al. CARL lncRNA inhibits anoxia-induced mitochondrial fission and apoptosis in cardiomyocytes by impairing miR-539-dependent PHB2 downregulation. Nature communications. 2014 Apr 7; 5: 3596.
10.Wang K, Long B, Zhou L Y, et al. CARL lncRNA inhibits anoxia-induced mitochondrial fission and apoptosis in cardiomyocytes by impairing miR-539-dependent PHB2 downregulation. Nature communications. 2014 Apr 7; 5: 3596.

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1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?

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