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    1. 公司產品

      miRNA陰性對照

      GenePharma公司為客戶提供不同長度的microRNA mimics control,microRNA mimics control是基于線蟲C. elegans 的micoRNA設計的。這個陰性對照已經通過BLASTN比對所有的人、小鼠以及大鼠的基因組序列以及microRNA序列,microRNA序列來自sanger miRNA數據庫(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)

      產品描述


      GMR-miRTM microRNA mimics conrol的應用:

      利用GMR-miRTM microRNA mimics control 消除非序列特異性的作用效應
      可以全面了解mimics以及背景效應之間的異同


      目錄號

      產品名稱

      規格

      純化方式

      價格

      交貨期限

      B04001

      microRNA mimics?單鏈陰性對照

      1 OD

      HPLC

      ¥120

      2個工作日

      B04002

      microRNA mimics?雙鏈陰性對照

      1 OD

      HPLC

      ¥120

      2個工作日


      吉瑪為客戶提供不同長度的microRNA inhibitors control,microRNA inhibitors control是基于線蟲C. elegans 的micoRNA設計的。這個陰性對照已經通過BLASTN比對所有的人、小鼠以及大鼠的基因組序列以及microRNA序列,microRNA序列來自sanger miRNA數據庫(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)

      GMR-miRTM microRNA inhibitors control的應用:

      利用GMR-miRTM microRNA inhibitor control 消除非序列特異性的作用效應
      可以全面了解inhibitors以及背景效應之間的異同


      目錄號

      產品名稱

      規格

      純化方式

      價格

      交貨期限

      B04003

      microRNA inhibitors?陰性對照

      1 OD

      HPLC

      ¥120

      2個工作日



      標記 microRNA mimics 陰性對照

      吉瑪為客戶提供不同長度的microRNA mimics control,microRNA mimics control是基于線蟲C. elegans 的micoRNA設計的。這個陰性對照已經通過BLASTN比對所有的人、小鼠以及大鼠的基因組序列以及microRNA序列,microRNA序列來自sanger miRNA數據庫(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)?
      GMR-miRTM microRNA FAM labeled microRNA mimics conrol是用來檢測microRNA mimics 的轉染效率用熒光倒置顯微鏡可以直接觀察轉染效果以及siRNA分布情況

      目錄號

      產品名稱

      規格

      純化方式

      價格

      交貨期限

      B04004

      FAM標記?microRNA mimics?單鏈陰性對照

      1 OD

      HPLC

      ¥150

      2個工作日

      B04005

      FAM標記?microRNA mimics?雙鏈陰性對照

      1 OD

      HPLC

      ¥150

      2個工作日


      GMR-miRTM FAM 標記 microRNA inhibitors 陰性對照

      吉瑪為客戶提供不同長度的microRNA inhibitors control,microRNA inhibitors control是基于線蟲
      C. elegans 的micoRNA設計的。這個陰性對照已經通過BLASTN比對所有的人、小鼠以及大鼠的基因組序列以及microRNA序列,microRNA序列來自sanger miRNA數據庫(http://microrna.sanger.ac.uk/sequences)?
      吉瑪GMR-miRTM FAM labeled microRNA inhibitors control用來檢測microRNA inhibitor的轉染效率以及在細胞內的分布情況。

      目錄號

      產品名稱

      規格

      純化方式

      價格

      交貨期限

      B04006

      FAM標記?microRNA inhibitors?陰性對照

      1 OD

      HPLC

      ¥200

      2個工作日

      功能介紹與實驗實例

      實驗數據

      使用方法

      A.siRNA轉染的方法

      哺乳動物轉染的常見方法有:磷酸鈣共沉淀、電穿孔法、DEAE-葡聚糖和polybrene、機械法(例如,顯微注射和基因槍)、陽離子脂質體試劑,其中陽離子脂質體試劑轉染法是目前最常用的轉染方法。

      應用脂質體型轉染試劑進行轉染需要注重的幾個方面:

      1、轉染試劑的用量
      2、siRNA的用量
      3、轉染時的細胞密度
      4、轉染時的操作順序
      5、細胞與轉染試劑/siRNA復合物的溫浴的時間



      B.Lipofectamin2000 轉染試劑

      選擇最適合的轉染試劑和轉染條件,往往取決于不同的哺乳動物細胞類型和不同的核酸分子。Lipofectamin2000適用于核酸的體內和體外操作,可應用于DNA、RNA、反義寡核苷酸、siRNA的轉染,也可應用于DNA/siRNA的共轉染操作;是一種新型的高效siRNA轉染試劑。

      Lipofectamin2000的應用領域:

      1、原代培養細胞和轉化細胞株的基因轉染
      ?
      2、siRNA高通量轉染試驗
      ?
      3、DNA轉染;DNA和siRNA的共轉染
      ?
      4、核酸(siRNA、DNA、RNA)的體內導入試驗
      ?
      5、□ 貼壁細胞和懸浮細胞轉染



      Lipofectamin2000 的特點:

      不必更換培養基,操作簡便易行,可在半小時內完成操作
      ?
      ?
      在含血清培養基中也能表現高轉染效率
      ?
      ?
      細胞毒性低;適用細胞廣泛
      ?
      ?
      即用型試劑,可在含有抗生素的完全培養基中轉染
      ?
      ?
      基于脂質的轉染試劑,確保沒有RNAse活性
      ?
      ?
      □ 可介導siRNA高轉染細胞及體內siRNA的高效導入




      C.Lipofectamin2000適用的細胞類型

      Lipofectamin2000轉染試劑可廣泛應用于多種細胞系的DNA和siRNA轉染如:HeLa(人頸部癌細胞)、MCF-7(人乳房癌細胞)、Hep3B(人肝細胞癌細胞)、COS-7(猴腎細胞)、Neuro-2a(鼠神經母細胞瘤細胞)、NIKS(人角質化細胞)、B16(鼠黑素瘤細胞)、DLD-1(人結腸癌細胞)、NIH/3T3(鼠胚胎成纖維細胞)、HT-29(人結腸腺癌細胞)、A549(人肺癌細胞)、CHO-k1(倉鼠卵巢細胞)和293(腺病毒5 DNA轉化的人胚胎腎細胞),SVRbag4細胞等。




      D.轉染前細胞培養

      在細胞板上培養細胞時,應使細胞匯合在24小時內達到70-90%。

      細胞培養用品 表面積(mm2/孔)

      細胞密度

      培養基(μL /孔)
      96孔板 50 1.5′104-5.0′104 100μL
      48孔板 100 3.0′104-1.0′105 200μL
      24孔板 200 8.0′104-2.0′105 500μL
      12孔板 401 1.6′105-4.0′105 1.0 mL
      6孔板 962 3.0′105-8.0′105 2.0 mL
      35 mm 962 3.0′105-8.0′105 2.0 mL
      60 mm 2827 1.0′106-2.5′106 6.0 mL

      E.合適的lipofectamin2000用量

      合適的siRNA(DNA):lipofetamin2000比例對核酸的高效轉染有重要影響;我們推薦的DNA:lipofetamin2000為1:0.5—1:5(ug:ul),siRNA:lipofectamin2000為1:0.01-1:0.1(pmol:ul)一般情況下,此范圍內都可獲得高的轉染效率。

      細胞培養用品 表面積(mm2/孔) 細胞密度 培養基(μL /孔)
      96孔板 5pmol/0.2μg 100μL 0.25μl/0.5μl
      24孔板 20pmol/0.8μg 500μL 1μl /2μl
      12孔板 40 pmol /1.6μg 1 mL 2μl /4μl
      6孔板 100 pmol /4.0μg 2 mL 5μl /10μl
      35 mm 100 pmol /4.0μg 2 mL 5μl /10μl
      60 mm 600 pmol /8.0μg 5 mL 10μl /20μl

      產品說明書

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      2.Kong LY, Xue M, Zhang QC, Su CF. In vivo and in vitro effects of microRNA-27a on proliferation, migration and invasion of breast cancer cells through targeting of SFRP1 gene via Wnt/β-catenin signaling pathway. Oncotarget. 2017 Feb; 8(9): 15507-19.

      3.Kong X, Liu F, Gao J. MiR-155 promotes epithelial-mesenchymal transition in hepatocellular carcinoma cells through the activation of PI3K/SGK3/β-catenin signaling pathways. Oncotarget. 2016 Oct 4; 7(40): 66051-60.?

      4.Li X, Liang Q, Zhang W, Li Y, Ye J, Zhao F, Chen X, Wang S. Bio-inspired bioactive glasses for efficient microRNA and drug delivery. Journal of Materials Chemistry B. 2017 Jul.

      5.Ren Y, Chen Y, Liang X, Lu Y, Pan W, Yang M. MiRNA-638 promotes autophagy and malignant phenotypes of cancer cells via directly suppressing DACT3. Cancer Letters. 2017 Apr 1; 390: 126-36.?

      6.Sun Y, Xu J, Xu L, Zhang J, Chan K, Pan X, Li G. MiR-503 Promotes Bone Formation in Distraction Osteogenesis through Suppressing Smurf1 Expression.?Scientific Reports. 2017 Mar; 7: 409.

      7.Xue X, Qiu Y, Yang HL. Immunoregulatory Role of MicroRNA-21 in Macrophages in Response to Bacillus Calmette-Guerin Infection Involves Modulation of the TLR4/MyD88 Signaling Pathway.?Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 May 12; 42(1): 91-102.

      8.Yu F, Guo Y, Chen B, Shi L, Dong P, Zhou M, Zheng J. LincRNA-p21 Inhibits the Wnt/β-Catenin Pathway in Activated Hepatic Stellate Cells via Sponging MicroRNA-17-5p.?Cellular Physiology and Biochemistry. 2017 Jun; 41(5): 1970-80.

      9.Zhou Z, Wan J, Hou X, Geng J, Li X, Bai X. MicroRNA-27a promotes podocyte injury via PPARγ-mediated β-catenin activation in diabetic nephropathy. Cell death & disease. 2017 Mar; 8(3): e2658.

      10.Zeng Z, Wang K, Li Y, Xia N, Nie S, Lv B, Zhang M, Tu X, Li Q, Tang T, Cheng X. Down-regulation of microRNA-451a facilitates the activation and proliferation of CD4+ T cells by targeting Myc in patients with dilated cardiomyopathy. Journal of Biological Chemistry. 2017 Apr 7; 292(14): 6004-13.


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      1. RNA干擾研究工具
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