產品描述

GMR-miRTM ?microRNA mimics

吉瑪為客戶提供不同長度、不同形式的microRNA mimics，microRNA序列來自sanger miRNA數據庫（http://microrna.sanger.ac.uk/sequences）
GMR-miRTM microRNA mimics的應用，利用GMR-miRTM microRNA mimics模擬活體microRNA活性來研究gain-of-function效應，篩選調控基因表達和影響細胞發育過程的miRNAs，深入研究miRNA在一些生物過程中的作用，如細胞的發育、增殖、分化和凋亡，發現和驗證內源性的miRNA target。

備注：

1. 保證序列正確、質量和純度達標，達到共同保證要求，轉染效率80%保證一種qPCR方法能檢測到miRNA上調顯著性差異（與對照比較），只接受一次無效投訴，需款到后發送重合產品，如果重新合成后再次無效，則不再接受投訴處理。由于靶基因調控因素較多，不保證其調控相關基因變化。

2. 針對circRNA過表達，鑒于不同細胞，不同circ序列等因素都會影響環化效果，我們確保將客戶指定序列構建正確（有測序結果證實，對于高GC重復序列可能會有缺失，評估后都會予以說明），對于成環效果，不予保證。如果客戶檢測無效且已付款，我們可以免費重新更換一次側翼序列重新構建一次。如果再次無效則不再免費重做。目前我們成功率大約在70%左右（指環化轉染過表達測序驗證完全正確，如需驗證費用另計：一條目的circRNA和對照轉染工具細胞293T,陽性和對照及空白細胞3個樣品驗證環化表達效率并測序過表達組環化序列，費用5000～6000元，預付50%啟動實驗，無效只收預付款）。

功能介紹與實驗實例

產品： GMR-miRTM microRNA mimics
目錄號： B01001
規格： 2 OD
純化方式： HPLC純化?
產品形式: 干粉?
儲存條件： 在-20℃或者-80℃條件下長期存放

質量控制?

PAGE檢測： 產品是準確分子量大小且經過特殊化學分子修飾的雙鏈mimics分子。?
HPLC純化： 經過HPLC純化并測定miRNA mimics,純度》95%?
注意事項 ： RNA oligo在操作過程中，如果有外源的核酸酶存在，RNA oligo容易發生降解。在進行相關實驗中，請帶手套進行操作，盡量避免RNAase污染，試管，移液槍和槍頭都要避免污染。收到產品后盡快儲存在-20℃或-80℃環境中。?

MicroRNA mimics 的重懸：

1、在最大轉速為4,000g的低速條件下離心EP管，讓miRNA mimics 聚集在試管的底部。

2、輕輕的打開管蓋。

3、1OD加入DEPC水125ul,配成20uM的儲存液。

4、柔和地用移液槍吹打儲備液5-6次。

5、根據具體用量情況分裝，避免多次凍融。

6、在重新儲存的時候注意密封好EP管。

7、貯存在-80℃,以備使用。

使用方法

miRNA mimics 是根據microRNA 成熟體序列設計的雙鏈小RNA分子，用于模擬內源性成熟體miRNA序列。mimics包括一條與目標miRNA成熟體序列一致的序列，以及一條與miRNA成熟體序列互補的序列。特異的miRNA mimics 能夠被導入到表達對應的miRNA細胞中，模擬microRNA的作用，或者與構建有miRNA結合位點的雙熒光素報告系統結合，驗證miRNA與靶基因之間的調控關系。

mRNA表達水平分析?

為了分析miRNA的上調水平，miRNA mimics 可以被轉染進入細胞并通過 Northern blotting 檢測，以及實時定量熒光PCR檢測的方法進行檢測。

靶基因表達水平分析?

通過對轉染miRNA mimics 和陰性對照序列的細胞內mRNA靶基因進行實時定量熒光PCR檢測和western Blotting 檢測，可以檢測靶基因蛋白的表達水平，驗證miRNA與靶基因之間的調控關系。

miRNA3’UTR靶位點驗證分析

通過將一個或多個預測的miRNA3‘UTR結合靶位點構建到報告質粒上，并將miRNA mimics 和報告質粒共轉染細胞，mimics可以抑制報告質粒上的報告基因，從而可以直接檢驗mimics和miRNA預測結合位點之間的作用關系。我們建議使用miRNA mimics 陰性對照作為參照，陰性對照的實驗濃度，轉染條件與實驗組相同。
轉染程序?

轉染效率對不同的細胞株和不同的轉染試劑是不同的。
最優的轉染條件還是需要通過實驗來確定。我們建議優化時的miRNA mimics的濃度范圍可以放寬至1-100nM之間。

?優化轉染效率是使得miRNA mimics活性最大化的關鍵因素之一，對每種轉染試劑而言，首先要確定一款合適的轉染試劑，主要看從以下幾點

1、轉染試劑的量?
2、miRNA agomir的量?
3、轉染時的細胞密度?
4、轉染時的操作順序?
5、細胞與轉染試劑/siRNA復合物的接觸時間

產品說明書

相關文獻

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4.Li X, Liang Q, Zhang W, Li Y, Ye J, Zhao F, Chen X, Wang S. Bio-inspired bioactive glasses for efficient microRNA and drug delivery. Journal of Materials Chemistry B. 2017 Jul.

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10.Zeng Z, Wang K, Li Y, Xia N, Nie S, Lv B, Zhang M, Tu X, Li Q, Tang T, Cheng X. Down-regulation of microRNA-451a facilitates the activation and proliferation of CD4+ T cells by targeting Myc in patients with dilated cardiomyopathy. Journal of Biological Chemistry. 2017 Apr 7; 292(14): 6004-13.

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目錄分類 本商品目錄中的產品介紹按以下內容分類：

1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具?

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