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全基因合成
與傳統的從生物體的核酸(基因組DNA或mRNA)釣取方法相比,人工合成全基因有以下優點:
(1)合成周期短,還可以保證序列100%正確無誤;
(2)可以對密碼子進行優化,以提高基因的表達效率;由于每個物種偏愛的編碼子不同,當異源蛋白在 E.coli 里表達時,有些蛋白很難得到高表達。如果將真核生物偏愛的密碼子改為原核生物偏愛的密碼子,就可以實現真核生物的基因的高效表達;
(3)當只知道某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列時,也可以通過人工合成基因的方法進行克隆和表達;
(4)可根據需要進行基因的定點突變以改造基因;
(5)研究人員根據自己的意愿設計得到自然界中很難獲得甚至不存在的基因。
吉瑪全基因合成服務流程:
1. 當客戶提供DNA或者氨基酸序列或者基因ID號時,我們將根據客戶的要求對提供的序列進行分析,為客戶提供免費基因設計服務,最終序列經客戶確認后作為基因合成的基本信息。根據最終序列的具體情況設計合成方案,通過業務員或技術員給客戶做出報價。
2. 與客戶達成一致意見后,簽訂基因合成服務協議和保密合同,客戶交納相應預付款。預付款到賬即為基因合成開始期限,我們將立即進行單鏈 Oligo 合成、DNA片段拼接等工作,然后把全長基因克隆于載體中,再通過DNA測序確認合成基因的正確性。
3. 測序結果如果發現有錯誤位點,我們會采取相應的技術手段進行修復校對,保證整個序列的正確性。
4. 提供實驗結果:包括測序彩色峰圖、含有目的基因的重組質粒及含該質粒的甘油菌等。
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吉瑪全基因合成交貨期限及收費標準:
基因全長(bp) | 交貨期限(工作日) | 價格(¥) |
≤500 | 7-10 | 1000元 |
500-3,000 | 10-30 | 2元/bp |
3,000-6,000 | 30-40 | 3元/bp |
≥6,000 | 每增加1Kb增加5-10個工作日 | 4元/bp |
特殊序列 | 協商 | 協商 |
備注:1)小于300bp的基因,統一按300bp收費;2)以上基因均指構建到克隆載體pUC57中;如需構建表達載體或客戶提供載體需額外加收1000元;3)基因結構復雜(如:10bp以上的重復序列;8bp以上的同一堿基的連續結構;GC含量超過70%等)時需視具體情況另行協商收費標準。4)如需空載體對照200元/20ug?;
吉瑪全基因合成真核過表達載體類型
目錄號 | 產品名稱 | 啟動子 | 熒光標簽 | 真核抗性 | 原核抗性 |
C05001 | pEX-1(pGCMV/MCS/EGFP/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05002 | pEX-2(pGCMV/MCS/IRES/EGFP/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05003 | pEX-3(pGCMV/MCS/Neo) | CMV | -- | Neo | Kan |
C05004 | pEX-4(pGCMV/MCS/T2A/EGFP/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05005 | pEX-5(pGCMV/EGFP/MCS/Neo) | CMV | EGFP | Neo | Kan |
C05006 | pEX-6(pGCMV/MCS/RFP/Neo) | CMV | RFP | Neo | Kan |
C05007 | pEX-7(pGCMV/RFP/MCS/Neo) | CMV | RFP | Neo | Kan |
吉瑪全基因合成真核過表達載體圖譜:
1、我公司用于基因合成的標準克隆載體為pUC57,如需克隆到指定的載體中,則該載體應由您提供,我公司將以最優惠的價格幫您完成,每次亞克隆需增加五個工作日,并在結算時按克隆難易程度收取1000元的亞克隆費用。我們提供的甘油菌一般為Top10菌株。
2、若需要提供密碼子優化服務,請注明需要優化,并提供給如下訊息:(1) 需要合成的蛋白序列或DNA序列;(2) 宿主表達系統;(3) 兩端的限制性酶切位點,優化后的序列中需要避免的限制性酶切位點;(4) 優化后的序列中需要保留的限制性酶切位點。
3、服務協議簽訂之后,您不得隨意更改基因序列;在基因合成的過程中,我公司會在每周五的時候向您報告基因合成的進展情況。
4、為您提供的產品和技術資料包括:(1) 不少于50ug的含目的基因的重組質粒一份;(2) 含上述重組質粒的甘油菌一份;(3) 基因序列100%正確的原始測序報告電子版一份和序列比對文件;(4) 基因合成報告單一份等。
5、我公司承諾:對客戶的基因序列不做任何形式的擴散、開發或利用,對相關信息實行完全保密,公司提交產品一個月后,即徹底銷毀所有相關的引物、質粒和菌種。
以化學合成DNA oligo為基礎,人工合成目的基因的過程。
全基因合成優勢
(1)合成周期短,還可以保證序列100%正確無誤。(2)可以對密碼子進行優化,以提高基因的表達效率。(3)當只知某一蛋白或多肽的氨基酸序列而不知其核苷酸序列時,也可以通過人工合成基因的方法進行克隆和表達。(4)可根據需要進行基因的定點突變以改造基因。(5)研究人員根據自己的意愿設計得到自然界中很難獲得甚至不存在的基因。
產品種類
< GPS 1-1 化學合成基因>
< GPS 2-1 基因定點突變>
< GPS 2-2 目的基因的獲取及其克隆>
< GPS 2-3 密碼子優化和基因設計服務>
< GPS 2-4 質粒提取服務>
出貨提供產品及數據資料包括:
1) 高純度質粒, 大約 10~50ug DNA;
2)含有重組質粒的甘油菌液(500ul);
3)測序原始圖譜、序列及載體圖譜;
4)全基因合成報告單 ;
5)備注:通常不提供合成的具體方法和實驗步驟;如必須提供則200元/份。
GenePharma 基因合成報告單模板
工作編號:xxxx
客戶姓名 |
xxx |
基因名稱 |
xxx |
基因長度 |
xxxbp |
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克隆載體 |
xxx |
克隆位點 |
xxx/xxx |
宿主菌 |
Top10 |
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交付材料 |
技術資料 |
測序報告正本壹份(電子版) |
√ |
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比對圖譜壹份(電子版) |
√ |
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質粒 |
壹份,DNA含量≈50μg (xxx) |
√ |
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菌株 |
含合成基因重組質粒的甘油菌(xxx) 500μl |
√ |
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客戶注意事項 |
客戶接到本公司合成的合同基因后,如對結果有疑問,請在本報告單簽發之日起一個月內與本公司取得聯系。一個月后本公司將根據合同銷毀封存的各種資料和質粒,不再受理客戶的任何申訴。 |
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報告簽發 |
簽發人 |
xxx |
簽發日期 |
xxxx |
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基因簽收 |
簽收人 |
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簽收日期 |
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注意事項
GenePharma所提供的質粒為液體質粒,可以直接用于細胞轉染及其他分子生物學實驗。如果用戶在使用過程中發現質粒的細胞毒性較大,可以通過其他方法制備更高純度的質粒。
甘油菌液為載體的過夜培養物與甘油的混合物,甘油的終濃度為20%。在4℃可保存2周,在-20℃可保存2個月,在-80℃可長期保存。
運輸溫度:常溫。用戶收到試劑盒后,應根據相應的條件保存各組分。
使用方法
1.Lei Xi? Meixi Peng Shuiqing Liu et al. Hypoxia-stimulated ATMactivation regulates autophagy-associated exosome release from cancer-associated ibroblasts to promote cancer cell invasion. Journal of Extracellular Vesicles 2021 Sep;10(11):e12146
2.Hongwei Su1, Tao Tao, Zhao Yang et al. Circular RNA cTFRC acts as the sponge of MicroRNA-107 to promote bladder carcinoma progression. Molecular Cancer? ? ? ? ? ?(2019) 18:27 https://doi.org/10.1186/s12943-019-0951-0.
3. Jing Zhang, Lidan Hou, Rui Liang et al. CircDLST promotes the tumorigenesis and metastasis of gastric cancer by sponging miR-502-5p and activating the NRAS/MEK1/ERK1/2 signaling. Molecular Cancer (2019) 18:80? ?https://doi.org/10.1186/s12943-019-1015-1.
4. Hang Song, Ji Ma1, Zhixuan Bian et al. Global pro?ling of O-GlcNAcylated and/or phosphorylated proteins in hepatoblastoma. Signal Transduction and Targeted Therapy 2019 Oct 11;4:40.
5. Wei Xu, Si-Da Han, Can Zhang et al. The FAM171A2 gene is a key regulator of progranulin expression and modifies the risk of multiple neurodegenerative diseases. SCIENCE ADVANCES 2020 Oct 21;6 : eabb3063.
6.Liang Wang1,2, Jing Yang1, He-nan Wang et al. LncRNA BCYRN1-induced autophagy enhances asparaginase resistance in extranodal NK/T-cell lymphoma. Theranostics 2021 Jan 1; 11(2): 925-940.
7. Su-Jie Ni, Li-Qin Zhao, Xiao-Feng Wang et al. CBX7 regulates stem cell-like properties of gastric cancer cells via p16 and AKT-NF-κB-miR-21 pathways. Journal of Hematology & Oncology 2018 Feb 8; 11:17.
8. Jian Chen, Jiali Jin, Xi Zhang et al. Microglial lnc-U90926 facilitates neutrophil in?ltration in ischemic stroke via MDH2/CXCL2 axis. Molecular Therapy 2021 Apr 19; 29 No 9.
9.Zhonglin Zhu, Zeyin Rong, Zai Luo et al. Circular RNA circNHSL1 promotes gastric cancer progression through the miR-1306-3p/SIX1/vimentin axis. Molecular Cancer 2019 Aug 22; 18: 126
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15.Yuan, Z., Yuan, Z., Hasnat, M., Zhang, H., Liang, P., Sun, L.(2020). A new perspective of? triptolide-associated? hepatotoxicity:? the? relevance? of? NF-κB? and? NF-κB-mediated? cellular? FLICE-inhibitory protein. Acta Pharmaceutica Sinica B.
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目錄分類 本商品目錄中的產品介紹按以下內容分類:
1. RNA干擾研究工具
2. MicroRNA研究工具
產品價格 本產品目錄中標示的價格均為國內統一零售參考價,全部為人民幣價格。如果大量定購時,在標準價格的基礎上有不同程度的優惠。
全基因過表達載體(mRNA, lncRNA):
1. 基因合成費用1.5*基因長度+1000;
2. 序列超過3kb,或特殊序列高GC重復序列等特殊詢價周期
3. 我們確保將客戶指定序列構建正確(有測序結果證實,對于高GC重復序列可能會有缺失,評估后都會予以說明),如有缺失會免費重復修復一次。保證在工具細胞293T中RNA水平上調2倍。不保證蛋白及其他功能結果。與其他基因融合表達不保證表達基因效果。
4. 如果經過公司293T驗證有上調表達顯著差異(qPCR),并提供PDF版本驗證結果(驗證結果產權不屬與客戶),客戶如需驗證結果完整服務報告,需要另行支付驗證費用3000元,并支付前期貨款,收到貨款后提交全部原始結果。如果驗證無效,可以免費重新構建一次或退票退款或做預付款。如果再次無效則不再免費重新轉錄,已經付款做預付款處理。
全基因過表達載體(circRNA):
1.?構建費用2*基因長度,低于2000元的按照2000計算;
2.?序列超過3kb,或特殊序列高GC重復序列等特殊詢價周期12-25個工作日
3.?我們確保將客戶指定序列構建正確(有測序結果證實,對于高GC重復序列可能會有缺失,評估后都會予以說明),對于成環效果,不予保證。如果客戶檢測無效且已付款,我們可以免費重新更換一次側翼序列重新構建一次。如果再次無效則不再免費重做。
4.?如需驗證費用另計:一條目的circRNA和對照轉染工具細胞293T,陽性和對照及空白細胞3個樣品驗證環化表達效率并測序過表達組環化序列,費用5000~6000元,預付50%啟動實驗,無效只收預付款)。
質量保證 凡吉瑪公司的產品均有嚴格的質量保證。如果我們發現確實存在質量問題時,保證更換產品。如果在到貨后一個月之內用戶無提出異議,我們將視本產品為優良產品而不再受理索賠事宜。提出產品異議(或索賠)時,切莫在產品使用完(或快使用完)后提出,以備本公司回收產品,確認產品質量。如果因為您訂錯制品需要退貨時,請務必在三天內退貨。同時請您千萬不要拆開包裝,拆封后的產品不再受理退貨事宜。發生索賠事宜時,公司只保證在產品價格額度范圍之內酌情賠償,恕不受理超過制品價格額度以上之部分。
上海公司的聯絡方式如下:
公司名稱:上海吉瑪制藥技術有限公司
地址:上海市浦東新區哈雷路1011號9幢602室
郵編:201203
電話:021-51320195,021-51370738,021-51370739,4006900195
E-mail:order@genepharma.com(產品訂購)support@genepharma.com(技術支持)
上海、南京、浙江、安徽、云南、山東、福建、重慶、四川、貴州、西藏、陜西、甘肅、寧夏、新疆、青海、河南、山西、香港、澳門、臺灣以及其他境外客戶訂貨地區請聯系上海公司
蘇州公司的聯絡方式如下:
公司名稱:蘇州吉瑪基因股份有限公司
地址:蘇州工業園區東平街199號
郵編:215123
電話:0512-86668828
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下單前請務必核對訂購表客戶信息和訂購內容無誤,訂單一經確認,當天即啟動生產。 超過當日17:00后不能修改或者取消,如果需要取消訂單,由此產生的費用,將由客戶承擔。
【取消訂單費用規則】
(1)當日17:00前,免費修改或取消。
(2)當日17:00到次日17:00前,按該項產品金額的50%收取。
(3)次日17:00后,按該項產品金額的100%收取。